分光光度法是在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性或定量分析,上海全光谱波长超微量分光光度计试用。常用的波长范围为:(1)200~380nm的紫外光区,(2)380~780nm的可见光区,(3)2.5~25μm(按波数计为4000cm<-1>~400cm<-1>)的红外光区,上海全光谱波长超微量分光光度计试用。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度,上海全光谱波长超微量分光光度计试用,所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定,定期进行校正检定。Micro Drop为一款全波长(185~910nm)超微量紫外可见分光光度计。上海全光谱波长超微量分光光度计试用
超微量分光光度计比色法测定蛋白质浓度: BCA法:这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2+反应产生Cu+,后者与BCA形成螯合物,形成紫色化合物,吸收峰在562nm波长。此化合物与蛋白浓度的线性关系极强,反应后形成的化合物非常稳定。相对于Lowry法,操作简单,敏感度高。但是与Lowry法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。 Bradford法:这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应,产生的有色化合物吸收峰595nm。其比较大的特点是,敏感度好,是Lowry和BCA两种测试方法的2倍;操作更简单,速度更快;只需要一种反应试剂;化合物可以稳定1小时,方便结果;而且与一系列干扰Lowry,BCA反应的还原剂(如DTT,巯基乙醇)相容。但是对于去污剂依然是敏感的。**主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大,无可比性。 甘肃双检测模式超微量分光光度计每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应消光因子。
Micro Drop紫外可见检测功能: 1. 在功能键中选择紫外-可见。 2. 输入样品编号。 3. 增加需要检测的波长值。 4. 可以选择基线校正,默认的校准波长为750nm,也可以重新输入一个校准波长。 5. 选择叠加显示可以在采样曲线框中显示多个检测样品的实验结果。 6. 用干净的无尘纸擦干净上下基座,使用合适的液体建立空白对照,空白对照液体能够溶解目标溶液。空 白对照液体的pH值和离子浓度应和检测样品一样。 基座模式:取1-2μl空白溶液加到基座上,放下检测臂并点击空白检测。 比色皿模式:插入比色皿时注意仪器上箭头指示方向。光束(2mm宽)位置在比色皿底部以上8.5mm的位置,请按照比色皿生产厂家的建议加入液体。 7. 按做空白检测一样加入样品,点击检测按钮开始检测。
分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光线透过测试的样品后,部分光线被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。 单色光辐射穿过被测物质溶液时,被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比,其关系如下式: A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc 式中 :A 为吸光度; I0为入射的单色光强度; I 为透射的单色光强度; T 为物质的透射率; k 为摩尔吸收系数; L 为被分析物质的光程,即比色皿的边长; c 为物质的浓度; 物质对光的选择性吸收波长,以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后可用同样条件将该供试品配成溶液,测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区,除某些物质对光有吸收外,很多物质本身并没有吸收但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多,且常使用单色光纯度较差的仪器,故测定时应用标准品或对照品同时操作。 测试只在可见光区有吸收的样品时使用玻璃比色皿。
超微量分光光度计在核酸定量和分析中的应用: 分光光度测定法是一项定量和分析生物成分的成熟技术。其中,核酸是生物实验室**常检测的生物成分之一。确定这些样品的浓度和纯度对许多下游实验至关重要。 核酸主要吸收260nm下的紫外光,其浓度可以应用朗伯比尔定律通过它们的相关消光系数和样品光程计算出来。 首先,260nm的紫外光直接照射样品,并且穿过样品,而另一边的光电检测器则测定有多少光被吸收。通过对照参比(一般是样品稀释液),可以定量样品中的核酸浓度。 A230是碳水化合物较高吸收峰的吸收波长。甘肃操作简便超微量分光光度计样品检测
A260/A280:是核酸纯度的指示值。上海全光谱波长超微量分光光度计试用
在分光光度计中,将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时,便可得到与不同波长相对应的吸收强度。如以波长(λ)为横坐标,吸收强度(A)为纵坐标,就可绘出该物质的吸收光谱曲线。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法,称为分光光度法,也称为吸收光谱法。用紫外光源测定无色物质的方法,称为紫外分光光度法;用可见光光源测定有色物质的方法,称为可见光光度法。它们与比色法一样,都以Lambert-Bee定律为基础。上海宝予德科学仪器有限公司欢迎大家来电咨询!上海全光谱波长超微量分光光度计试用
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