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Micro Drop蛋白质检测功能:Protein Bradford检测方式:Bradford是常用的蛋白定量检测的方法。它通常用于浓度比较低的蛋白的浓度检测。与其他比色法一样,Bradford法检测蛋白浓度时必须构建一个标准曲线。Bradford法是根据蛋白质在酸性溶液中,能够使考马斯亮蓝结合,使得染料的比较大吸收峰值变更为595nm来检测蛋白浓度。检测蛋白-染料复合物在595nm处的吸光值,并在750nm处做基线校正,计算得出蛋白的浓度。常规检测使用试剂/蛋白样品的体积比为50:1,检测浓度范围为0.10mg/ml到8.0mg/ml(BSA),比较好线性浓度范围在0.01-1mg/ml。当使用基座检测时,推荐使用4μl样品和200μl Bradford试剂。微量检测使用试剂/样品的体积比为1:1,可以检测蛋白浓度范围从15ug/ml至125ug/ml。要准备足够的样品来做基座检测,建议使用10μl样品和10μlBCA试剂(使用PCR管)。 按照试剂盒生产厂家的说明来准备标准品和和构建标准曲线。确保在所有检测过程中,每个样品的处理时间及环境温度一致。分光光度法是在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性或定量分析。广东高灵敏度超微量分光光度计

超微量分光光度计主要是用来快速检测一些样品,比如蛋白、核酸等,几乎每一个分析实验室都离不开分光光度计,那么,超微量分光光度计怎么使用呢?***小编就Micro Drop为例,给大家介绍一下超微量分光光度计使用方法。在此之前,我们先来了解一下超微量分光光度计的原理,微量分光光度计是利用光源通过光片调整光坡长,射入样品液体中,再射入光电检测器将光能转换成电讯号。由样本及空白水样间所吸收之光能量差,与标准液之能量吸收值相比较,便可定样本中待测物浓度。Micro Drop为一款全光谱波长超微量分光光度计,适用于更宽浓度范围的样品检测,操作简便,即擦即测。云南国产超微量分光光度计核酸检测不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。

分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光线透过测试的样品后,部分光线被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。单色光辐射穿过被测物质溶液时,被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比,其关系如下式:A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc式中 :A 为吸光度;I0为入射的单色光强度;I 为透射的单色光强度;T 为物质的透射率;k 为摩尔吸收系数;L 为被分析物质的光程,即比色皿的边长;c 为物质的浓度;物质对光的选择性吸收波长,以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后可用同样条件将该供试品配成溶液,测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区,除某些物质对光有吸收外,很多物质本身并没有吸收但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多,且常使用单色光纯度较差的仪器,故测定时应用标准品或对照品同时操作。

超微量分光光度计比色法测定蛋白质浓度:BCA法:这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2+反应产生Cu+,后者与BCA形成螯合物,形成紫色化合物,吸收峰在562nm波长。此化合物与蛋白浓度的线性关系极强,反应后形成的化合物非常稳定。相对于Lowry法,操作简单,敏感度高。但是与Lowry法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。Bradford法:这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应,产生的有色化合物吸收峰595nm。其比较大的特点是,敏感度好,是Lowry和BCA两种测试方法的2倍;操作更简单,速度更快;只需要一种反应试剂;化合物可以稳定1小时,方便结果;而且与一系列干扰Lowry,BCA反应的还原剂(如DTT,巯基乙醇)相容。但是对于去污剂依然是敏感的。**主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大,无可比性。A320nm 或A340nm——是基线校准波长,为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子。

Micro Drop微阵列检测功能:通过这个功能可以筛选有效的荧光标记杂交探针用于芯片试验,这样避免潜在的不好的探针,可以提高试验效率。Micro Drop可以检测荧光染料的吸收光强度,比较低可以检测0.2pmol/μl的荧光染料。软件可以自动应用相应的波长检测样品的吸光值。1. 在功能键中选择微阵列。2. 输入样品编号。3. 选择检测样品的类型,默认的设定为DNA,消光因子为50。4. 选择浓度单位,默认的单位是μg/ml.5. 使用染料1或者染料2后面的下拉框来选择染料,默认的染料设定:染料1(Cy3),染料2(Cy5),如果*标记了一个染料,在染料2类型上选择无。6. 可以选择分析校正,默认的校准波长为340nm,也可以重新输入一个校准波长。7. 选择叠加显示可以在采样曲线框中显示多个检测样品的实验结果。8. 用干净的无尘纸擦干净上下基座,使用合适的液体建立空白对照,空白对照液体能够溶解目标溶液。空白对照液体的pH值和离子浓度应和检测样品一样。Micro Drop的基座模式可检测0.5-2μl的样本。辽宁性能稳定超微量分光光度计

蛋白质在280nm波长处有较大吸光值。广东高灵敏度超微量分光光度计

Micro Drop比色皿检测基本操作: 1. 准备好两个比色皿,一个加入空白检测液,一个加入样品,保证加入的液体量足够,能盖过光束,光束(2mm宽)位置在比色皿底部以上8.5mm的位置,请按照比色皿生产厂家的建议加入液体。 2. 抬起样品臂,把比色皿插入到仪器中,插入比色皿时要注意透光面,与仪器上面的光路指向的方向相对应。 3. 在做比色皿检测时样品臂必须放下来。 4. 在Micro Drop软件上的“选项”框中选择“使用比色皿”, 插入比色皿,勾选基线校正,设置相应参数进行空白检测及检测。 5. 当检测完成后,移出比色皿,倒出样品,清洗干净比色皿。 广东高灵敏度超微量分光光度计

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